Calculateur de Réaction de Ligature d'ADN

Calculez les quantités optimales d'insert et de vecteur pour la ligature

Déterminez les quantités précises d'ADN pour votre réaction de ligature. Prend en charge ng, pmol et ratios insert:vecteur personnalisés.

Exemples

Voyez comment configurer des réactions de ligature courantes.

Ligature Standard Ratio 3:1

Ligature

50 ng vecteur, 3000 pb ; 1000 pb insert ; ratio 3:1 ; 20 µl volume total.

Quantité d'ADN Vecteur (ng): 50 ng

Longueur du Vecteur (pb): 3000 bp

Longueur de l'Insert (pb): 1000 bp

Ratio Insert:Vecteur: 3:1

Volume Total (µl): 20 µl

Ratio 1:1, Petit Insert

Ligature

30 ng vecteur, 4000 pb ; 500 pb insert ; ratio 1:1 ; 15 µl volume total.

Quantité d'ADN Vecteur (ng): 30 ng

Longueur du Vecteur (pb): 4000 bp

Longueur de l'Insert (pb): 500 bp

Ratio Insert:Vecteur: 1:1

Volume Total (µl): 15 µl

Ratio Personnalisé (2,5:1), Gros Insert

Ligature

40 ng vecteur, 2500 pb ; 2000 pb insert ; ratio 2,5:1 ; 25 µl volume total.

Quantité d'ADN Vecteur (ng): 40 ng

Longueur du Vecteur (pb): 2500 bp

Longueur de l'Insert (pb): 2000 bp

Ratio Insert:Vecteur: 2.5:1

Volume Total (µl): 25 µl

Ratio 5:1, Pas de Volume Total

Ligature

60 ng vecteur, 5000 pb ; 1000 pb insert ; ratio 5:1 ; pas de volume total spécifié.

Quantité d'ADN Vecteur (ng): 60 ng

Longueur du Vecteur (pb): 5000 bp

Longueur de l'Insert (pb): 1000 bp

Ratio Insert:Vecteur: 5:1

Autres titres
Comprendre le Calculateur de Réaction de Ligature d'ADN : Un Guide Complet
Maîtriser la Ligature d'ADN pour le Clonage et la Biologie Synthétique

Qu'est-ce que la Ligature d'ADN ?

  • Définition et Objectif
  • Mécanisme Enzymatique
  • Importance dans le Clonage
La ligature d'ADN est le processus de jonction de deux fragments d'ADN à l'aide de l'enzyme ADN ligase. Cette réaction est fondamentale dans le clonage moléculaire, permettant aux scientifiques d'insérer des gènes ou d'autres séquences d'ADN dans des plasmides ou vecteurs pour la propagation et l'expression.
Pourquoi la Ligature est-elle Importante ?

Scénarios de Ligature Courants

  • Joindre un gène d'intérêt dans un vecteur plasmidique.
  • Réparer les cassures d'ADN en génie génétique.

Guide Étape par Étape pour Utiliser le Calculateur

  • Exigences d'Entrée
  • Choisir le Bon Ratio
  • Interpréter les Résultats
Pour utiliser le calculateur, entrez la quantité et la longueur de votre vecteur, la longueur de votre insert, et sélectionnez ou entrez votre ratio insert:vecteur souhaité. Le calculateur calculera la quantité optimale d'ADN insert nécessaire pour votre réaction de ligature.
Conseils pour des Calculs Précis

Conseils Pratiques

  • Utiliser un ratio 3:1 pour les ligatures à extrémités cohésives.
  • Ajuster le ratio pour les ligatures à extrémités franches.

Applications Réelles de la Ligature d'ADN

  • Clonage et Assemblage de Gènes
  • Biologie Synthétique
  • Utilisation Éducative
La ligature d'ADN est utilisée dans le clonage de gènes, la biologie synthétique et le génie génétique. Elle permet la construction de molécules d'ADN recombinantes pour la recherche, les thérapeutiques et les applications industrielles.
Où la Ligature est-elle Utilisée ?

Exemples d'Applications

  • Créer des plasmides recombinants pour l'expression de protéines.
  • Enseigner aux étudiants le clonage moléculaire.

Idées Fausses Courantes et Méthodes Correctes

  • Sélection du Ratio
  • Quantification de l'ADN
  • Configuration de la Réaction
Une idée fausse courante est que plus d'insert augmente toujours l'efficacité de ligature. En réalité, les ratios optimaux et la quantification précise sont essentiels. Le calculateur aide à éviter la surcharge ou la sous-charge d'ADN, ce qui peut réduire le succès du clonage.
Meilleures Pratiques pour la Ligature

Idées Fausses vs. Réalité

  • Utiliser trop d'insert peut conduire à des concatamères indésirables.
  • Une quantification précise de l'ADN améliore les résultats.

Dérivation Mathématique et Exemples

  • Formule de Ratio Molaire
  • Conversion ng vers pmol
  • Exemples Détaillés
Le calculateur utilise la formule : pmol = ng / (longueur pb × 0,66). Pour trouver le ng d'insert requis : ng Insert = Ratio × ng Vecteur × (pb Insert / pb Vecteur). Cela assure le ratio molaire correct pour la ligature.
Exemple de Calcul

Exemples de Calculs

  • Pour 50 ng vecteur (3000 pb) et 1000 pb insert à ratio 3:1 : ng Insert = 3 × 50 × (1000/3000) = 50 ng.
  • Convertir 50 ng de 1000 pb insert : pmol = 50 / (1000 × 0,66) ≈ 0,076 pmol.