DNA连接反应计算器

计算连接的最佳插入片段和载体用量

确定连接反应的精确DNA用量。支持ng、pmol和自定义插入片段:载体比例。

示例

查看如何设置常见的连接反应。

标准3:1比例连接

连接

50 ng载体，3000 bp；1000 bp插入片段；3:1比例；20 µl总体积。

载体DNA用量 (ng): 50 ng

载体长度 (bp): 3000 bp

插入片段长度 (bp): 1000 bp

插入片段:载体比例: 3:1

总体积 (µl): 20 µl

1:1比例，小插入片段

连接

30 ng载体，4000 bp；500 bp插入片段；1:1比例；15 µl总体积。

载体DNA用量 (ng): 30 ng

载体长度 (bp): 4000 bp

插入片段长度 (bp): 500 bp

插入片段:载体比例: 1:1

总体积 (µl): 15 µl

自定义比例 (2.5:1)，大插入片段

连接

40 ng载体，2500 bp；2000 bp插入片段；2.5:1比例；25 µl总体积。

载体DNA用量 (ng): 40 ng

载体长度 (bp): 2500 bp

插入片段长度 (bp): 2000 bp

插入片段:载体比例: 2.5:1

总体积 (µl): 25 µl

5:1比例，无总体积

连接

60 ng载体，5000 bp；1000 bp插入片段；5:1比例；未指定总体积。

载体DNA用量 (ng): 60 ng

载体长度 (bp): 5000 bp

插入片段长度 (bp): 1000 bp

插入片段:载体比例: 5:1

其他标题
理解DNA连接反应计算器：综合指南
掌握克隆和合成生物学的DNA连接

什么是DNA连接？

  • 定义和目的
  • 酶促机制
  • 克隆中的重要性
DNA连接是使用DNA连接酶连接两个DNA片段的过程。这个反应在分子克隆中是基础性的，允许科学家将基因或其他DNA序列插入质粒或载体中进行扩增和表达。
为什么连接很重要？

常见连接场景

  • 将感兴趣的基因插入质粒载体。
  • 修复基因工程中的DNA断裂。

使用计算器的分步指南

  • 输入要求
  • 选择正确比例
  • 解释结果
要使用计算器，请输入载体的用量和长度、插入片段的长度，然后选择或输入您所需的插入片段:载体比例。计算器将计算连接反应所需的插入片段DNA最佳用量。
准确计算的技巧

实用技巧

  • 粘性末端连接使用3:1比例。
  • 平末端连接调整比例。

DNA连接的实际应用

  • 克隆和基因组装
  • 合成生物学
  • 教育用途
DNA连接用于基因克隆、合成生物学和基因工程。它能够构建重组DNA分子用于研究、治疗和工业应用。
连接在哪里使用？

应用示例

  • 创建用于蛋白质表达的重组质粒。
  • 教授学生分子克隆知识。

常见误解和正确方法

  • 比例选择
  • DNA定量
  • 反应设置
一个常见的误解是更多的插入片段总是增加连接效率。实际上，最佳比例和准确定量是关键。计算器有助于避免DNA过载或不足，这可能会降低克隆成功率。
连接的最佳实践

误解与现实

  • 使用过多插入片段可能导致不需要的串联体。
  • 准确的DNA定量改善结果。

数学推导和示例

  • 摩尔比例公式
  • ng到pmol转换
  • 计算示例
计算器使用公式：pmol = ng / (bp长度 × 0.66)。要找到所需的插入片段ng：插入片段ng = 比例 × 载体ng × (插入片段bp / 载体bp)。这确保了连接的正确摩尔比例。
计算示例

计算示例

  • 对于50 ng载体（3000 bp）和1000 bp插入片段，3:1比例：插入片段ng = 3 × 50 × (1000/3000) = 50 ng。
  • 转换50 ng的1000 bp插入片段：pmol = 50 / (1000 × 0.66) ≈ 0.076 pmol。